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RIPA裂解液(強(qiáng),含PMSF)

點(diǎn)擊次數(shù):154  發(fā)布時(shí)間:2024/6/19 14:41:50

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公司名稱:本生(天津)健康科技有限公司 型 號(hào):PC012 生產(chǎn)地址:中國(guó)大陸 已獲點(diǎn)擊:154 簡(jiǎn)單介紹: RIPA裂解液(強(qiáng),含PMSF)本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來(lái)。
詳細(xì)內(nèi)容

RIPA裂解液強(qiáng),PMSF

 

PC012                                

RIPA lysate (strong)                                    


簡(jiǎn)介:

RIPA主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA裂解液的配方有很多種,根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。RIPA裂解液(強(qiáng))(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解,并獲得總蛋白的裂解液,其裂解強(qiáng)度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液()

伊勢(shì)久RIPA裂解液(強(qiáng),PMSF)的主要由NP-40deoxycholate、SDS組成,含蛋白酶抑制劑。由于含有較高濃度的去垢劑,因此不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

 

組成:

 

產(chǎn)品名稱

PC012-100ml

PC012-500ml

RIPA 裂解液(強(qiáng),PMSF

100ml

500ml

使用說(shuō)明書

一份

 

存儲(chǔ)條件:

RIPA裂解液保存于2~8℃。12個(gè)月有效期。

 

操作步驟(僅供參考)

無(wú)需配制,直接使用。

()貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室溫溶解混勻,根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

2、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,低速離心,棄上清。

3、 按照6孔板每孔加入150250 ul含有PMSF的裂解液的比例,加入RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于細(xì)胞13內(nèi),細(xì)胞就會(huì)被裂解。

4、 離心(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

5、 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室溫溶解混勻,根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

2、 低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。

3、 用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150250 ul裂解液的比例,加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。

4、 離心(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

5、 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()組織樣本

1、 取Enhanced Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

2、 把組織剪切成細(xì)小的碎片,越小越好。取在液氮或超低溫冰箱中冷凍以上的組織,迅速 用液氮研磨,研磨過(guò)程盡量控制在12 min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

3、 按照每20 mg組織加入150250 ul 裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

4、 離心(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

5、 進(jìn)行后續(xù)的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事項(xiàng):

1、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,可以不用清洗。

2、 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

3、 如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50100萬(wàn)細(xì)胞/離心管,然后再裂解。

4、 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。

5、 溶解伊勢(shì)久RIPA Lysis Buffer時(shí),應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間,避免有效成分失效。

6、 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。

7、 細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)在低溫環(huán)境下進(jìn)行。

 


 

更新時(shí)間:2024/11/7 10:20:13



標(biāo)簽:RIPA裂解液   
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